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本制品是一种用于活性提取哺乳动物细胞的胞浆蛋白、胞核蛋白的提取试剂。本制品含有一种比较温和的非变性去垢剂，缓冲系统pH7.6，能够确保蛋白高效抽提的同时还可以保留蛋白样品中蛋白或酶的活性，便于进行后续的蛋白活性分析检测。由于本裂解液比较温和，对于膜蛋白提取效果不好，不建议用于膜蛋白提取；由于组织的特殊性，本制品不建议用于组织蛋白的非变性提取。

本制品提取的蛋白样品，能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于蛋白的非变性电泳和多种生物化学和细胞生物学用途。例如，Tris-甘氨酸非变性电泳、Blue Native电泳、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)，ELISA等常规生化分析，luciferase、β-gal、碱性磷酸酶、氯霉素乙酰转移酶等报告基因(Report gene)酶活性检测，PKA、PKC和酪氨酸激酶等蛋白激酶活力的检测，以及带有HA、Flag、Myc、V5、His和GST等标签蛋白的分离纯化等方面的用途。

使用本制品获得的蛋白样品可用BCA蛋白浓度试剂盒或Bradford法蛋白定量试剂盒(去垢剂兼容)进行定量分析。由于含有较高浓度去垢剂，不建议使用常规型的Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白含量。

• 高效：提取效率比冻融、超声等方法效率高。
  
• 非变性：最大限度保持蛋白活性，不会干扰下游应用。
  
• 方便：贴壁细胞可以直接在器皿上裂解，不用刮下细胞。
  
• 快速：可在常温下快速裂解细胞。

• 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
  
• 需自备蛋白酶抑制剂或者购买通用型蛋白酶抑制剂混合物片剂(不含EDTA)和/或磷酸酶抑制剂。

• 准备即用型裂解缓冲液：向预冷的裂解缓冲液中加入自备的蛋白酶抑制剂；如果进行磷酸化研究，还需要加入自备的磷酸酶抑制剂，混匀，冰上预冷待用。
  
• 贴壁细胞总蛋白提取：
  
  • 去除培养液，加入适量1×PBS，轻柔漂洗一遍，不要扰动贴壁细胞。按照下表直接在培养器皿中加入裂解液，移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，冰上裂解细胞5分钟，间歇混匀。
    

    培养板规格/培养皿表面积	细胞量	裂解液推荐使用量
    100mm培养皿*	~1.5×107	0.5～1mL
    60mm培养皿	~5×106	0.25～0.5mL
    35mm培养皿	~2×106	0.2～0.4mL
    6孔板	~2.5×106	200～400μL
    24孔板	~5×105	100～150μL
    96孔板	~1×105	50～100μL

    • 100mm培养皿收集的细胞量~1.5×10⁷（50mg），可以提取~3mg总蛋白。
  • 细胞收集于1.5mL离心管中，冰上继续裂解15分钟，间歇混匀。
    
  • 4℃ 16000g离心10分钟，取上清。
• 悬浮细胞总蛋白提取：
  
  • 450g 4℃离心5min收集细胞；用适量1×PBS重悬细胞，450g 4℃离心5min收集细胞；重复漂洗细胞一次；
    
  • 按照细胞沉淀体积（PCM）20μL（~20mg）加入200μL裂解缓冲液的比例加入裂解液，混匀细胞沉淀，冰浴处理15分钟，间歇混匀。
    
    • 2×10⁶ Jurkat细胞，其细胞沉淀体积大约为20μL（~20mg），可以提取~1.5mg总蛋白。
  • 4℃ 16000g离心10分钟，取上清。
• 可选步骤：蛋白样品去除去垢剂：
  如果实验中遇到以下情况，建议进行步骤4。非变性电泳，发现样品中的去垢剂导致泳道拖尾；样品中的去垢剂影响后续实验，如ELISA或酶活性测定；样品中的去垢剂对质谱实验有影响。
  
  • 选购我公司的去垢剂去除柱的预处理：
    
    • 取出柱子，放入套管中。
      
    • 旋开管盖，不要拧掉柱子底部堵头，加入0.4mL 1×PBS，盖紧管盖，常温静置2min，活化填料。
      
    • 拧掉柱子底部堵头，将柱子放入套管中，1000g离心1min，弃流穿液。
      
      • 离心力不要高于1000g，过高的离心力会损伤填料，降低去垢剂去除效率。
    • 在柱子管盖上标记填料在柱子内的倾斜方向，随后离心步骤均按同一倾斜方向在离心机内放置柱子。
      
    • 柱子中加入0.4mL 1×PBS，1000g离心1min，弃流穿液。至此，柱子活化结束，备用。
  • 样品去垢剂去除：
    
    • 将柱子转移到2mL尖底离心管中，加入25～100μL待处理样品（样品浓度高于0.5μg/μL），常温静置2min。
      
    • 1000g离心2min，收集离心管内样品。